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質(zhì)譜 (MS) 使研究人員能夠研究許多特性,例如樣品的分子量、結(jié)構(gòu)、特性、數(shù)量和純度。當(dāng)與液相色譜技術(shù)相結(jié)合能成為一種強(qiáng)大的分析工具,能夠從復(fù)雜的生物混合物(如牛奶、血清和全脂)中提取有關(guān)一系列化合物的有意義的數(shù)據(jù),包括藥物代謝物、肽和蛋白質(zhì)-細(xì)胞裂解物。
一、液相色譜與質(zhì)譜
在將樣品引入 MS 儀器之前,通常通過過濾掉顆粒物、濃縮分析物、脫鹽和通常分離出可能導(dǎo)致背景離子或抑制電離的化合物來制備樣品。大多數(shù)情況下,許多或所有這些步驟都是由 HPLC、UPLC 系統(tǒng)完成的。樣品制備需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理。比如流動相進(jìn)系統(tǒng)前,通過恒譜生溶劑過濾器過濾顆粒污染物。
HPLC、UPLC 這些系統(tǒng)可以在高壓/低流速下運(yùn)行,并且允許用戶通過直接連接、在線、與MS 通過電離裝置。如果是超高壓液相色譜系統(tǒng),系統(tǒng)內(nèi)部壓力非常高,對于色譜耗材也需要uhplc專用。2.1#超高壓UPLC保護(hù)柱預(yù)柱捕獲樣品中增加背壓和影響基線噪音的污染物,延長色譜柱的使用壽命。
電離裝置的早期化身要求樣品在真空下電離,嚴(yán)重限制了可以分析的化合物的選擇。較新的技術(shù),如電噴霧電離 (ESI),現(xiàn)在可以在大氣壓下進(jìn)行電離,從而大大擴(kuò)展了曲目。一旦離子化,分析物(主要由水或質(zhì)子或電子的添加或損失產(chǎn)生的離子)將與中性(不帶電的)分子進(jìn)行機(jī)械和靜電分離。根據(jù)儀器的配置,允許所有或選定的子集通過檢測器,該檢測器繪制離子相對于信號強(qiáng)度(表示豐度)的 m/z 圖表。
二、串聯(lián)質(zhì)譜
從單級 MS 獲得的 m/z 信息非常有價(jià)值,有時(shí)可用于識別小分子。但對于更大、更復(fù)雜的分子,通常需要互補(bǔ)的結(jié)構(gòu)信息。通過 LC/MS 分析復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物通常從胰蛋白酶消化過夜以產(chǎn)生肽開始,然后通過收集串聯(lián) MS 數(shù)據(jù)在肽水平鑒定蛋白質(zhì)。
在串聯(lián) MS 中,樣品依次通過儀器的不同階段,每個階段都會對其進(jìn)行選擇或破碎等過程。例如,在三重四極桿 MS 中,第一階段選擇特定的 m/z 范圍,丟棄其余部分。然后,這些剩余的離子通過在第二階段與中性分子碰撞而碎裂。新破碎的離子然后進(jìn)入第三階段,根據(jù)實(shí)驗(yàn),掃描產(chǎn)物離子的光譜或選擇性地監(jiān)測一些離子。然后將這些光譜與實(shí)際或理論光譜數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較,以確定它們的身份,使研究人員能夠?qū)⑺鼈儊碜缘哪阜肿悠礈愒谝黄稹?/span>
三、LC/MS 的其他用途
LC/MS 的強(qiáng)大功能也經(jīng)常用于識別蛋白質(zhì)修飾,例如磷酸化和二硫鍵橋接。在 LC 提供的分離和串聯(lián) MS 丟棄非分析物離子的能力之間,LC/MS 是許多不同應(yīng)用的選擇。