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液相色譜基線異常的其中四種原因

更新時(shí)間:2022-09-09      點(diǎn)擊次數(shù):2751

一、導(dǎo)致高基線和變化基線的流動(dòng)相雜質(zhì):

        雜質(zhì)在流動(dòng)相中高度溶解的特定情況下,它們不會(huì)被色譜柱截留,并有助于在整個(gè)色譜圖中產(chǎn)生高于正常的檢測(cè)器信號(hào)。使用梯度洗脫時(shí),如果雜質(zhì)僅存在于梯度中使用的一種溶劑中,則檢測(cè)器信號(hào)可能會(huì)緩慢變化并且與在任何時(shí)間點(diǎn)對(duì)流動(dòng)相有貢獻(xiàn)的溶劑比例有關(guān)。

        流動(dòng)相雜質(zhì)不會(huì)表現(xiàn)為看起來(lái)像典型色譜峰的信號(hào)特征,因此它們不會(huì)直接與分析物峰本身發(fā)生沖突。但是如果雜質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)與分離中的目標(biāo)分析物相似,則雜質(zhì)可以表現(xiàn)為基線中看起來(lái)像典型峰的特征。有時(shí)這些被稱為“鬼峰",因?yàn)榧词箾]有樣品注入,它們也會(huì)持續(xù)存在于基線中。

色譜柱-DSC_7707 (2)

二、檢測(cè)器對(duì)主要流動(dòng)相組分的響應(yīng):

        有時(shí)候用于 LC 方法的溶劑制備中的微小變化會(huì)對(duì)基線的外觀產(chǎn)生巨大影響。這種效應(yīng)的一個(gè)典型例子是從磷酸鹽緩沖流動(dòng)相變?yōu)槭褂眉姿嶙鳛樘砑觿┑牧鲃?dòng)相。盡管磷酸鹽物質(zhì)對(duì)低至約 200 nm 的紫外光具有高度透明性,但羧酸鹽物質(zhì)(如甲酸鹽、乙酸鹽)比約 230 nm 以下的磷酸鹽吸收更多。當(dāng)使用梯度洗脫時(shí),很容易觀察到這種差異,并且添加劑僅存在于流動(dòng)相梯度中使用的一種溶劑中(例如,大部分水性溶劑)。

三、由于泵問題導(dǎo)致流動(dòng)相組成不一致:

         粘性止回閥和滯留氣泡是高壓泵頭流量不一致的常見原因,當(dāng)二元泵系統(tǒng)中的兩個(gè)泵中的一個(gè)發(fā)生故障時(shí),可能會(huì)導(dǎo)致通過(guò) HPLC 色譜柱并最終到達(dá)檢測(cè)器的流動(dòng)相成分發(fā)生變化。如果使用中的檢測(cè)器對(duì)這些成分變化很敏感,那么異常檢測(cè)器基線可能是真正由泵引起的問題的征兆。舉個(gè)例子, A 溶劑含有乙酸銨,B 溶劑是乙腈,并且在 210 nm 處使用 UV 檢測(cè)的情況。在這種情況下,A 溶劑比 B 溶劑吸收更多的光,但如果 A/B 混合物的成分隨時(shí)間保持一致,則將觀察到平滑、平坦的檢測(cè)器基線。但是,如果來(lái)自 A 通道的流量由于止回閥問題或氣泡而變得不一致,則 A/B 混合物的成分將不一致,從而導(dǎo)致基線中出現(xiàn)鋸齒狀圖案。

四、溫度影響:

        不同的檢測(cè)器以不同的方式受到溫度變化的影響。折射率 (RI) 檢測(cè)的信號(hào)基線對(duì)溫度變化非常敏感。因此,穩(wěn)定檢測(cè)器本身和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的溫度將有助于最大限度地減少基線漂移。UV 吸光度檢測(cè)器也容易發(fā)生溫度變化,這會(huì)導(dǎo)致基線漂移,但與 RI 檢測(cè)器相比,變化程度較小。與過(guò)去的舊設(shè)計(jì)相比,現(xiàn)代紫外線檢測(cè)器設(shè)計(jì)對(duì)實(shí)驗(yàn)室溫度變化的影響要小得多。

色譜柱柱管-DSC_6069

        面對(duì)色譜系統(tǒng)中的流動(dòng)相存在雜質(zhì)的情況,恒譜生可以為您解決這些問題,恒譜生流動(dòng)相過(guò)濾頭具有以下這些特性:

(1)性能穩(wěn)定,抗沖擊和交變負(fù)載能力優(yōu)于其他金屬過(guò)濾材料;

(2)孔隙均勻穩(wěn)定,透氣性好,壓力損耗小、過(guò)濾精度高、分離效果過(guò)濾性能穩(wěn)定;

(3)機(jī)械強(qiáng)度優(yōu)異,無(wú)須外加骨架支撐保護(hù),安裝和使用簡(jiǎn)單,維護(hù)方便,組裝性好。

(4)易于反吹、可清洗、再生能力強(qiáng),反復(fù)清洗再生后過(guò)濾性能恢復(fù)90%以上,使用壽命長(zhǎng)、材料利用率高。

溶劑吸濾頭-DSC_3654

       恒譜生鬼峰捕集去除柱可以有效吸附流動(dòng)相中的雜志,從而縮短了方法驗(yàn)證和雜質(zhì)分析的時(shí)間。鬼峰捕集去除柱主要的特點(diǎn)是能夠去除溶劑包括有機(jī)溶劑中的雜質(zhì),在反相色譜梯度分析時(shí),將小柱安裝在梯度混合器和自動(dòng)進(jìn)樣器之間,不僅能夠去除流動(dòng)相中的雜質(zhì),還可以有效捕集管路和混合器中的雜質(zhì)。

鬼峰去除柱-DSC_3835

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