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如何通過hplc測定濃度及解決常見問題

更新時間:2023-05-08      點擊次數(shù):1874

一、要確定樣品中某種成分的濃度,應(yīng)遵循以下步驟:

(1)標準溶液的制備:要確定樣品中某組分的濃度,必須制備已知該組分濃度的標準溶液。標準溶液在組成和使用的溶劑方面應(yīng)與樣品相似。必須準備多種不同濃度的標準溶液以創(chuàng)建校準曲線。

(2)校準曲線創(chuàng)建:下一步是通過繪制每個標準溶液的峰面積與其濃度的關(guān)系來創(chuàng)建校準曲線。校準曲線是峰面積與濃度之間的線性關(guān)系,曲線的斜率代表組分的響應(yīng)因子。響應(yīng)因子是峰面積與組分濃度的比值。

(3)從峰面積計算濃度:創(chuàng)建校準曲線后,可以通過測量樣品中組分的峰面積并使用校準曲線將峰面積轉(zhuǎn)換為濃度來確定樣品中組分的濃度。某組分濃度的計算公式為:濃度 =樣品中組分的峰面積/組分的響應(yīng)因子。

       通過測量色譜圖中的峰面積來確定各組分的濃度。峰面積與樣品中組分的濃度成正比。組分的濃度越大,峰面積越大。然而其他因素,如色譜柱效率、儀器流速和色譜柱溫度都會影響峰面積,因此在確定組分濃度時必須考慮這些因素。要確定一種成分的濃度,必須制備一種已知該成分濃度的標準溶液,并且必須通過繪制每種標準溶液的峰面積與其濃度的關(guān)系圖來創(chuàng)建校準曲線。

二、要在HPLC中實現(xiàn)準確的濃度測定,應(yīng)遵循以下步驟:

(1)色譜柱和儀器的校準:為了最大限度地減少錯誤并獲得準確的結(jié)果,必須正確校準色譜柱和儀器。色譜柱應(yīng)定期維護,同時色譜儀器應(yīng)使用適當(dāng)?shù)臉藴屎腿軇┻M行校準。

(2)合適的標準品和溶劑:必須使用與樣品相似的合適標準品和溶劑。使用與樣品不相似的標準品和溶劑會影響結(jié)果的準確性。

(3)樣品制備:必須正確制備樣品以確保準確的結(jié)果。應(yīng)將樣品均質(zhì)化并過濾,以去除任何影響結(jié)果的雜質(zhì)。樣品也應(yīng)正確進樣到色譜柱中,以免柱子過載或影響結(jié)果的準確性

色譜柱-DSC_3033

三、解決常見問題:

  在 HPLC 中可能會出現(xiàn)一些影響結(jié)果準確性的常見問題。一些最常見的問題包括:

(1)色譜柱退化:隨著時間的推移,色譜柱會退化并影響結(jié)果的準確性。定期維護色譜柱并使用適當(dāng)?shù)娜軇┖蜆藴势房梢詼p少此問題。

(2)儀器漂移:儀器會隨時間漂移,導(dǎo)致組分的保留時間和峰面積發(fā)生變化。定期校準儀器可以最大限度地減少這個問題。

(3)樣品污染:樣品污染會影響結(jié)果的準確性。適當(dāng)?shù)臉悠分苽浜瓦^濾可以最大限度地減少這個問題。

      今天恒譜生分享的知識先到這啦,希望對您的工作有所幫助!

恒譜生色譜柱結(jié)構(gòu)圖