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在高效液相分析檢測樣品的過程中,液相保護柱會受到來自于樣品及色譜系統(tǒng)的污染,從而導致色譜柱耐用性差、壽命縮短。來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指,HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒,以及流動相系統(tǒng)過濾不全部殘留的固體顆粒。來自于樣品的污染主要指,未全部溶解的樣品或者已全部溶解的樣品進入色譜系統(tǒng)中,由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異,導致沉淀析出污染系統(tǒng)。特別是對于中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體及生物藥品的檢測,因基質(zhì)的復雜性,色譜柱受污染的情況會更加嚴重。污染會導...
在正相色譜中,一般采用極性鍵合固定相,硅膠表面鍵合的是極性的有機基團,鍵合相的名稱由鍵合上去的基團而定。常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)鍵合相。流動相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機溶劑,如烴類溶劑,或其中加入一定量的極性溶劑(如氯仿、醇、乙腈等),以調(diào)節(jié)流動相的洗脫強度。通常用于分離極性化合物。一般認為正相色譜的分離機制屬于分配色譜。組分的分配比K值,隨其極性的增加而增大,但隨流動相中極性調(diào)節(jié)劑的極性增大(或濃度增大)而降低。同時,極性鍵...
溶劑混合時氣泡的形成會導致液相色譜分析中的許多問題,這些問題可以通過對流動相進行脫氣來避免。當溶劑混合時,空氣的溶解度低于同比例的純?nèi)軇^量的空氣會從溶液中析出/冒泡。脫氣是用來描述溶解氣體從溶液中出來的術(shù)語。這種現(xiàn)象也可能發(fā)生在HPLC系統(tǒng)中,其中粗糙的表面會產(chǎn)生氣泡形成的成核位點。由于產(chǎn)生死體積,氣泡還可以改變流動相通過色譜柱的流量。在HPLC分析中,通過對流動相脫氣,可以在很大程度上避免因氣泡形成而產(chǎn)生的問題。一、HPLC系統(tǒng)中的除氣1.低壓混合:低壓混合系統(tǒng)更容易形...
在日常分離分析工作中,高效液相色譜柱的使用和維護十分重要,色譜柱使用是否得當,直接影響色譜柱的壽命,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護色譜柱。高效液相色譜柱的正確使用:(1)柱子在裝卸、更換時,動作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動,以免柱床產(chǎn)生空隙。(2)如果儀器用來做常規(guī)分析,樣品種類有限,但分析次數(shù)多,則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱,這樣有助于延長柱子的壽命。(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動...
高效液相色譜系統(tǒng)(HPLC)是指分析化學中的一種技術(shù),用于識別、分離和量化混合物中的每種成分。C8和C18均指色譜柱鍵合面的烷基鏈,都用于高效液相色譜系統(tǒng)。一、什么是C18:C18柱、C8柱和C4柱都是直鏈烷基硅烷相。C18是辛基癸基硅烷,含有18個與二氧化硅結(jié)合的碳。因此C18比C8(8個碳)或C4(4個碳)具有更多的碳和更長的碳鏈。由于額外的碳,C18具有更大的表面積,流動相必須穿過。這在鍵合相和洗脫物之間提供了更多的相互作用時間。因此,樣品洗脫得更慢,分離度更高。C18...
一、HPLC色譜柱的安裝:首先檢查色譜柱與儀器的連接和管道是否匹配。使用色譜柱測試程序中建議的過濾和脫氣流動相沖洗您的HPLC泵和管路。確保系統(tǒng)中沒有氣泡。將流速設(shè)置為0.1mL/min并連接到色譜柱入口,確保流速沿色譜柱上箭頭指示的方向。擰緊進入色譜柱的末端接頭,將流速增加到1mL/min(僅適用于4.6mmID色譜柱)持續(xù)5分鐘。在連接到流通池之前,停止流動并擦拭色譜柱的出口端以去除其他任何的顆粒。將色譜柱出口連接到流通池,以1mL/min的速度將大約10個色譜柱體積通過...